1、 挑取第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于麥芽浸膏營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置 30℃±1℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 42h～48h，即為第 3 代培養(yǎng)物。

      2、 用 10.0mL 吸管吸取 5.0mL～10.0mL 第 3 代培養(yǎng)物，接種羅氏瓶，并搖動(dòng)使菌液布滿(mǎn) MEA 培養(yǎng)基表面，將多余肉湯培養(yǎng)物液體吸出，置 30℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 42h～48h。

      3、 向羅氏瓶培養(yǎng)物中加入 5.0mL～10.0mL 0.05%（V/V）吐溫 80 生理鹽水溶液，刮洗黑曲霉菌分生孢子于溶液中，將孢子懸液移入裝有玻璃珠的三角瓶中，輕輕振搖 1min ，過(guò)濾除去菌絲后，顯微鏡下（400 倍）觀(guān)察是否仍有菌絲存在，若有可經(jīng) 5000 r/min～6000 r/min離心 20min。再次在顯微鏡下（400 倍）觀(guān)察，必要時(shí)重復(fù)上述步驟。

      4、 黑曲霉菌分生孢子懸液冷藏保存不超過(guò) 2d，使用前，混合均勻，在顯微鏡下（400 倍）觀(guān)察是否有孢子出芽，若有則不得使用。

      5、 將制成的菌懸液，進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，按其結(jié)果用稀釋液稀釋至所需濃度，懸液定量殺滅試驗(yàn)時(shí)，菌懸液濃度為1×107CFU/mL～5×107CFU/mL。